大鼠外周血淋巴細胞分離液適用于從動物抗凝血液中分離淋巴細胞

本分離液為Ficoll、羥乙基淀粉550與泛影酸葡甲an的混合液?？鼓庵苎稍诜蛛x液中分層。離心時，在Ficoll、羥乙基淀粉的作用下紅細胞與粒細胞聚集并迅速沉降；此時，淋巴細胞及其他單個核細胞仍處于分離液上層，紅細胞污染可忽略不計。大部分血小板可在細胞清洗低速離心過程中去除。 其他人及動物多種比重細胞分離液，因不同種屬不同比重分離液的細胞離散系數(shù)及細胞帶電不同，用戶在制定分離液時應提供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。

適用于從動物抗凝血液中分離淋巴細胞，無菌條件下所分離的淋巴細胞可用于細胞培養(yǎng)等。本品僅供科研使用。

密度：1.0830±0.0001g/ml

本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

操作步驟：

1. 取新鮮抗凝全血（EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液，用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。

2. 在離心管中加入適量分離液（當稀釋后血液體積小于3mL時，加入3mL分離液；大于等于3mL，加入等體積分離液。但二者的總體積不能超過離心管的三分之二，否則會影響分離效果），將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后將血液小心的平鋪于分離液上，因為兩者的密度差異，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多加樣時間較長，在離心之前出現(xiàn)紅細胞成團下沉屬正?，F(xiàn)象。）

3. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~1000g，離心20~30min（血液的體積越大所需的離心力越大，離心時間越長，*的分離條件需摸索，離心轉(zhuǎn)速zui大不超過1200g）。

4. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層：zui上層是稀釋的血漿層，中間是透明的分離液層，血漿與分離液之間的白膜層即為淋巴細胞層，離心管底部是紅細胞與粒細胞。

5. 小心的吸取白膜層細胞到15mL潔凈的離心管中， 10mL PBS或細胞洗滌液洗滌白膜層細胞。250g，離心10min。

6. 棄上清，5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞，250g，離心10min。

7. 重復步驟6

8. 棄上清，細胞重懸備用。

注意事項：

A. 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產(chǎn)品，為延長分離液保存時間，請在無菌條件下啟封，避免微生物污染。。

B. 分離液使用時應始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心，可能會導致白膜層中紅細胞污染加重。 

C. 血液樣本為新鮮抗凝血（采血2 h以內(nèi)），為保持淋巴細胞的活性，應避免冷凍和冷藏。

D. 稀釋血液或洗滌細胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會導致血細胞凝集，大大降低細胞得率及純度。

大鼠外周血淋巴細胞分離液適用于從動物抗凝血液中分離淋巴細胞